EBN phục hồi các biểu hiện filaggrin và filaggrin-2 đã được khử TNF-α thông qua việc tạo ra quá trình dưỡng ẩm và biệt hóa. 20 ng/mL) và chuẩn bị EBN được hiển thị. NANA (0,05, 0,1, 1 mM), và chiết xuất hoặc phân hủy EBN (1, 10, 100 μg/mL) đã được áp dụng, như đã chỉ ra. Dexamethasone ở 10 nM là đối chứng dương tính . (B) Huyết tương pFLG2-eGFP, bao gồm véc tơ pEGFP-N1 chứa chất khởi động filaggrin-2, được truyền vào tế bào sừng trong 24 giờ, sau đó là gieo hạt ở 1 × 10 ⁵ tế bào/mL trong đĩa đáy trong suốt màu đen 96 giếng. ủ EBN trước 24 giờ, tiếp theo là kích thích TNF-α (100 ng/mL) trong 24 giờ khác. Các liều như trong (A). Hình ảnh huỳnh quang đại diện được hiển thị, với liều lượng 1 mM và 100 μg/mL được chọn tương ứng cho chiết xuất hoặc phân hủy NANA và EBN (bảng bên trái). Hoạt động GFP của mỗi giếng được chuẩn hóa thành protein tổng số (bảng bên phải) . Nồng độ mRNA của PPARγ trong các tế bào sừng HaCaT được nuôi cấy sau 2 giờ điều trị đồng thời TNF-α (20 ng/mL) và chế phẩm EBN (bảng bên phải), được hiển thị . nồng độ mRNA của keratin 1 và keratin 10 trong tế bào sừng HaCaT nuôi cấy được hiển thị.NANA (1 mM), chiết xuất EBN và chất phân hủy (cả hai ở mức 100 μg/mL) được áp dụng trong 24 giờ hoặc đồng thời với TNF-α (20 ng/ mL) trong 2 giờ. CaCl₂ (0,16 mM) và dexamethasone (10 nM) là các biện pháp kiểm soát dương tính. Các giá trị được biểu thị bằng phần trăm thay đổi so với biểu thức cơ sở chuẩn hóa được đặt ở 0%, có nghĩa là ± SEM, n = 6. Các kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và *** p < 0,001 so với nhóm đối chứng hoặc nhóm được điều trị bằng TNF-α, tùy thuộc vào các thí nghiệm được thực hiện không có hoặc có TNF-α.

EBN ngăn chặn sự hình thành của các loại oxy phản ứng được kích thích bởi TNF -α . Kích thích -α (20 ng/mL) và được nhuộm bởi DCFH-DA trong 20 phút. Thời gian ủ trước 1 giờ của 20 mM NAC, một chất nhặt rác ROS đã biết, là một biện pháp kiểm soát dương tính. Hình ảnh huỳnh quang đại diện được hiển thị. NANA ở mức 1 mM, chiết xuất /tiêu hóa EBN (100 μg/mL) được hiển thị .Tổng khả năng chống oxy hóa của NANA (0,05, 0,1, 1 mM) và chiết xuất hoặc phân hủy EBN (1, 10, 100 μg/mL), như đã chỉ ra, được đo cho OD 570. (D) pARE- _Luc hoặc ( E ​​) pHRE- Các huyết tương Luc, mỗi huyết tương được gắn thẻ báo cáo luciferase của đom đóm, được truyền vào tế bào sừng trong 24 giờ, sau đó là kích thích TNF-α (20 ng/mL) và ủ EBN trong 6 giờ tương ứng. (F) Các mức mRNA của Nrf2 , HO-1, HIF-1α và HIF-2α trong các tế bào sừng HaCaT được nuôi cấy sau 6 giờ đồng xử lý TNF-α (20 ng/mL) và chế phẩm EBN được hiển thị. Liều lượng như trong (C). (tBHQ) ở 20 μM là một kiểm soát tích cực.n = 6. Các kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và *** p < 0,001 so với nhóm được điều trị bằng TNF-α.

EBN ức chế quá trình phosphoryl hóa do TNF- α gây ra bởi Iκ-Bα và NF-κB p65. , như đã chỉ ra. Tổng Iκ-Bα và NF-κB p65 (T-Iκ-Bα, 38 kDa và T-NF-κB p65, 65 kDa) và Iκ-Bα và NF-κB p65 được phosphoryl hóa (P-Iκ-Bα, 38 kDa và P-NF- κB p65, 65 kDa) được đánh giá bằng xét nghiệm Western blot. Thời gian thực hiện là 120 phút. Dexamethasone (đối chứng dương tính, 10 nM), NANA (1 mM), chiết xuất và phân hủy EBN (cả hai đều ở mức 100 μg/mL) được áp dụng, và sau đó các tế bào được ủ với TNF-α trong 5 phút sau đó. (C)Định lượng của các mức biểu hiện P-Iκ-Bα/T-Iκ-Bα và P-NF-κB p65/T-NF-κB p65 sau thời gian xử lý TNF-α khác nhau được trình bày. (D) Định lượng của P – Iκ -Bα/T-Iκ-Bα và P-NF-κB p65/T-NF-κB p65 mức độ biểu hiện từ tiền xử lý của (B) được hiển thị. tế bào sừng sau 4 giờ tiền xử lý NANA (1 mM), chiết xuất EBN và tiêu hóa EBN (cả hai đều ở mức 100 μg/mL) và kích thích TNF-α trong 5 phút được hiển thị, trong các hình ảnh tiêu điểm đại diện (bảng điều khiển bên trái). Tỷ lệ phần trăm cường độ hạt nhân P-NF-κB p65 so với tế bào chất trong các phương pháp điều trị khác nhau được hiển thị (bảng bên phải).= 3. Các kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và *** p < 0,001 so với nhóm được điều trị bằng TNF-α.

EBN ức chế quá trình phosphoryl hóa p38-MAPK do TNF-a gây ra . (B) được xử lý bằng chế phẩm EBN đơn thuần trong 1 giờ, TNF-α (20 ng/mL), D-sorbitol (đối chứng dương tính, 400 mM), NANA (0,05, 0,1, 1 mM), chiết xuất và phân hủy EBN ( cả hai ở mức 1, 10 , 100 μg/mL) đều được chỉ định. h tiền xử lý chuẩn bị EBN sau đó là kích thích TNF-α trong 5 phút. Liều lượng như trong (B).Dexamethasone ở 10 nM là một biện pháp kiểm soát tích cực.P38-MAPK toàn phần (p38-MAPK) và p38-MAPK phosphoryl hóa (p-p38 MAPK) (cả hai đều ở ∼38 kDa) được đánh giá bằng xét nghiệm Western blot.Các giá trị của P -p38 /T-p38 trong các điều kiện khác nhau được biểu thị bằng cách thay đổi nếp gấp thành hoạt động cơ bản chuẩn hóa được đặt ở 1, có nghĩa là ± SEM, n = 3. Các kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và * ** p < 0,001 so với nhóm đối chứng hoặc nhóm được điều trị bằng TNF-α trong (C) .

EBN ức chế quá trình phosphoryl hóa JNK do TNF-α gây ra, trong khi không cho thấy tác dụng đối với quá trình phosphoryl hóa thụ thể EGF do TNF -α gây ra. khoảng thời gian 0–2 giờ.Các giá trị của mức độ biểu hiện p-JNK/JNK tại các thời điểm khác nhau được hiển thị. (B) Sau khi bỏ đói huyết thanh 16 giờ, TNF-α cùng với chế phẩm EBN được áp dụng trong 20 phút. SP600125 ( chất ức chế JNK; 10 nM), NANA (0,05, 0,1, 1 mM), chiết xuất và phân hủy EBN (cả ở 1, 10, 100 μg/mL) được chỉ định. Tổng JNK (T-JNK-p46 và T- JNK-p54 đối với các đồng dạng ở 46 và 54 kDa tương ứng) và JNK phosphoryl hóa (P-JNK-p46 và P-JNK-p54 đối với các đồng dạng ở 46 và 54 kDa tương ứng) được đánh giá bằng các xét nghiệm Western blot (C )Sau 16 giờ bỏ đói huyết thanh, các tế bào sừng HaCaT nuôi cấy được cảm ứng bởi TNF-α (20 ng/mL) trong khoảng thời gian 0–30 phút. Các giá trị của mức độ biểu hiện p-EGFR/EGFR tại các thời điểm khác nhau được hiển thị. Sau 16 giờ bỏ đói huyết thanh, các tế bào sừng HaCaT nuôi cấy được ủ với chế phẩm EBN trong 20 phút (D) không có hoặc (E) đồng thời với TNF-α (20 ng/mL). 175 kDa ) được đánh giá bằng xét nghiệm Western blot. Các giá trị của P-JNK/T-JNK và P-EGFR/T-EGFR trong các điều kiện khác nhau được biểu thị bằng cách thay đổi nếp gấp thành hoạt động cơ bản chuẩn hóa được đặt ở mức 1, có nghĩa là ± SEM, n = 3. Kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và *** p< 0,001 so với đối chứng trong (D) hoặc nhóm được điều trị bằng TNF-α.

EBN cải thiện các triệu chứng của chuột bị viêm da dị ứng do DNCB . (1, 10, 100 mM), chiết xuất và tiêu hóa EBN (0,1, 1, 10 mg/mL) được áp dụng hàng ngày, như đã chỉ ra. Dexamethasone ở mức 0,12% là một biện pháp kiểm soát tích cực. Thử thách lại 7% DNCB được thực hiện vào ngày 6. Chuột bị giết vào ngày thứ 11. Phương pháp điều trị duy nhất bằng phương tiện (vaseline) được sử dụng làm mẫu trắng (B) Thời gian trầy xước và (C) mức độ nghiêm trọng của viêm da được đánh giá hàng ngày. Các giá trị được biểu thị bằng giá trị trung bình ± SEM, n = 6. Định lượng của các cytokine tiền viêm trong da được thu thập: (D)TNF-α, (E) IL-6 và (F) IL-1β, và (G) protein filaggrin rào cản da (FLG) được hiển thị. 0,1, 1, 10 mg/mL) đã được xác định, như đã chỉ ra. Dexamethasone ở mức 0,12% là một biện pháp kiểm soát dương tính. Các giá trị được biểu thị bằng số lần thay đổi đối với hoạt động cơ bản được chuẩn hóa được đặt ở mức 1 hoặc phần trăm thay đổi đối với hoạt động cơ bản được chuẩn hóa được đặt ở mức 0 %, trung bình ± SEM, n = 6. Các kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và *** p < 0,001 so với nhóm được xử lý DNCB.

EBN làm giảm cường độ của các triệu chứng ở chuột bị viêm da dị ứng do DNCB.Hình 7A (A) Hình ảnh đại diện của các đặc điểm da ở chuột viêm da dị ứng do DNCB gây ra được hiển thị (B) Hình ảnh đại diện của chuột được điều trị khác nhau vào ngày thứ 11 được hiển thị.

EBN làm giảm bớt độ dày của da ở chuột bị viêm da dị ứng do DNCB. Hình 7A( A) Hình ảnh vết H&E đại diện của phần da chuột trong các phương pháp điều trị khác nhau được hiển thị, * đánh dấu độ phóng đại. Độ dày của (B) da và (C) lớp biểu bì dưới các phương pháp điều trị khác nhau được đo tại năm khu vực được chọn ngẫu nhiên bên trong hình ảnh 10X. Sự phụ thuộc vào liều lượng của NANA (1, 10, 100 mM), chiết xuất và phân hủy EBN (0,1, 1, 10 mg/mL) đã được xác định, như đã chỉ ra. μm, trung bình ± SEM, n = 6. Các kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và *** p < 0,001 so với nhóm được điều trị bằng DNCB.

EBN làm giảm số lượng tế bào miễn dịch ở chuột bị viêm da dị ứng do DNCB. Hình 7A. Định lượng IgE huyết thanh trong máu thu thập được hiển thị. Dexamethasone ở mức 0,12% là đối chứng dương. Giá trị được biểu thị bằng giá trị trung bình ± SEM, n = 6. Kết quả có ý nghĩa thống kê được đánh dấu bằng * p < 0,05, ** p < 0,01 và * ** p < 0,001 so với nhóm được điều trị bằng DNCB.